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技術(shù)文章首頁(yè) > 技術(shù)文章 用什么方法才能正確的選擇標(biāo)記二抗
  • 用什么方法才能正確的選擇標(biāo)記二抗
  • 點(diǎn)擊次數(shù):2877 更新時(shí)間:2018-11-14
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  •   標(biāo)記二抗能與抗原特異性結(jié)合是可以結(jié)合的。如果一抗與將抗原*結(jié)合,則二抗處不會(huì)出現(xiàn)結(jié)合反應(yīng)現(xiàn)象,如果一抗不足以將抗原*結(jié)合,則多于抗原會(huì)大刀二抗處反應(yīng)。一抗一般是特異性抗體,二抗一般通用羊抗鼠、羊抗兔之類就可以。但是還需要首先得弄懂抗原、一抗、二抗的相互作用。
     
      標(biāo)記二抗是能和抗體結(jié)合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測(cè)抗體的存在,放大一抗的信號(hào)。二抗是利用抗體是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì),去免疫異種動(dòng)物,由異種動(dòng)物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對(duì)于此抗體的免疫球蛋白。用抗AIV H5亞型血凝素單克隆抗體為包被抗體,兔抗AIV IgG為第二抗體。
     
      標(biāo)記二抗原理:
      是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
     
      標(biāo)記二抗選擇要點(diǎn):
      1、種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購(gòu)買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可。
      2、標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗,以與后面的SP結(jié)合反應(yīng),而免疫熒光染色就需要購(gòu)買不同熒光素標(biāo)記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
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